Latar Belakang: Deteksi viabilitas M.leprae masih merupakan masalah yang sulit karena sifat kuman yang belum dapat dibiakkan pada media buatan. Teknik biomolekular dengan metode isolasi RNA sekarang dapat digunakan untuk deteksi viabilitas M.leprae, karena RNA akan segera rusak setelah kuman tersebut mati. Tujuan: Deteksi 16S rRNA M.leprae dari biopsi kulit dan darah tepi pasien kusta baru. Metoda: Biopsi kulit dan peripheral blood mononuclear cell (PBMC) diambil dari 24
pasien kusta baru di Unit Rawat Jalan RSU dr Sutomo, Surabaya. Semua sampel dilakukan isolasi RNA, síntesis cDNA dan deteksi 16S rRNA M.leprae dengan conventional PCR dan Real Time PCR menggunakan primer P2 (forward) dan P3 (reverse). Hasil: Dari 24 pasien (18 MB & 6 PB) didapatkan BTA positif pada MB 61.11%; PB 0%. Dengan conventional PCR didapatkan hasil positif pada sampel biopsi: MB 100% ; PB 50%, sedangkan pada PBMC: MB 72.22% ; PB 0%. Dengan Real Time PCR didapatkan hasil positif pada sampel biopsi: MB 100%; PB 50%, sedangkan pada PBMC: MB = 83.33% ; PB 33.33%. Secara conventional PCR tidak didapatkan perbedaan secara bermakna ekspresi 16S rRNA M.leprae pada sampel biopsi dan PBMC, baik pada tipe MB maupun tipe PB (p>0.05). Begitu pula dengan metoda Real Time PCR (p>0.05).Didapatkan perbedaan bermakna antara kuantitas 16S rRNA M.leprae pada sampel biopsi dan PBMC pada tipe MB (p<0.05)., tetapi tidak didapatkan perbedaan bermakna tipe PB (p>0.05). Kesimpulan: 16S rRNA M.leprae dapat dideteksi pada sampel biopsi maupun PBMC baik dari pasien kusta tipe PB maupun MB, menunjukkan proses sistemik yang sedang terjadi. Deteksi viabilitas  M.leprae berdasarkan 16S rRNA M.leprae dapat digunakan sebagai deteksi awal kusta yang berpotensi sebagai sumber transmisi, selain itu untuk evaluasi pengobatan yang berkaitan dengan potensi terjadinya relaps. (MDVI 2011; 38/3:118 - 123)

Kata kunci: kusta, viabilitas M.leprae, 16S rRNA, biopsi kulit, darah tepi

       Background: Detection of viable M.leprae is still a difficult problem due to the uncultivable characteristic of the bacilli. New biomolecular technique RNA isolation is now used for detection of viable M.leprae, since RNA is rapidly degraded upon cell death. Aim of Study: To detect 16S rRNA M.leprae from skin biopsy and blood of new leprosy patients. Material and Method: Skin biopsy and peripheral blood mononuclear cell (PBMC) were obtained from 24 newly diagnosed, untreated leprosy patients in dr. Sutomo Hospital, Surabaya. To all samples were performed RNA isolation, cDNA synthesis, PCR conventional and Real Time PCR using primer set P2 (forward) dan P3 (reverse).  Results: From 24 patients (18 MB & 6 PB): AFB staining positive: MB 61.11% ; PB 0% Conventional PCR positive: skin biopsy: MB 100%; PB 50%; PBMC: MB 72.22%; PB 0%. Real Time PCR positive: skin biopsy: MB 100% ; PB 50%; PBMC: MB 83.33% ; PB 33.33% Conventional PCR: no significant difference 16S rRNA between biopsy sample and PBMC, from MB and PB leprosy (p>0.05), same result was found with Real Time PCR (p>0.05). There is significant difference quantity of 16S rRNA M.leprae between biopsy sample and PBMC in MB type (p<0.05), but no significant difference in PB type (p>0.05). Conclusion: 16S rRNA M.leprae can be detected in skin biopsy and  blood from both of MB and PB leprosy, showing a systemic process occured. Detection of  viable Mycobacterium leprae by Reverse Transcription methods may prove to be useful in early detection of leprosy and potensy of transmission, also assessing the efficacy of treatment and potensy source of relapse. (MDVI
2011; 38/3:118 - 123)

Key words: Leprosy, viable Mycobacterium leprae, 16S rRNA, skin biopsy, peripheral blood